PCR實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)

Real-time qPCR常見參數(shù)

基線（baseline）通常是3-15個循環(huán)的熒光信號

同一次反應(yīng)中針對不同的基因需單獨(dú)設(shè)置基線

閾值（threshold）

自動設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍

手動設(shè)置：置于指數(shù)擴(kuò)增期，剛好可以清楚地看到熒光信號明顯增強(qiáng)

同一次反應(yīng)中針對不同的基因可單獨(dú)設(shè)置閾值，但對于同一個基因擴(kuò)增一定要用同一個閾值。

Ct值:與起始濃度的對數(shù)成線性關(guān)系。

分析定量時候一般取Ct:15-35。太大或者太小都會導(dǎo)致定量的不準(zhǔn)確。

Rn（Normalized reporter）是熒光報告基團(tuán)的熒光發(fā)射強(qiáng)度與參比染料的熒光發(fā)射強(qiáng)度的比值。

△Rn：△Rn是Rn扣除基線后得到的標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果（△Rn=Rn-基線）。

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